大鼠肝S9的原代肝細(xì)胞分離方法分享

 　　肝臟是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。常用的體外模型有肝微粒體、大鼠肝S9、肝胞質(zhì)液、原代肝細(xì)胞、肝組織切片、重組人代謝酶等。其中，原代肝細(xì)胞因具有較好的體外試驗(yàn)重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中。

 

　　肝細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，具有豐富的酶系及多種特異性功能，被廣泛用于生物化學(xué)、實(shí)驗(yàn)性肝損傷、藥代動力學(xué)、毒理學(xué)和致癌作用等研究。然而，分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細(xì)胞成為了關(guān)鍵步驟，分離的原代肝細(xì)胞在體外是否能夠存活

 

　　目前，原代肝細(xì)胞分離常用的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法因其對肝細(xì)胞損傷作用較小，在膠原酶消化細(xì)胞前使用了螯合劑，提高了肝細(xì)胞的產(chǎn)量和活力，分離的肝細(xì)胞數(shù)量多且活力好，成為了分離原代肝細(xì)胞的經(jīng)典方法。

 

　　兩步膠原酶灌注法先使用無鈣灌流液灌注，無鈣灌流液作為預(yù)灌液，可以將肝臟內(nèi)的殘留血液灌注出，除去或者減少細(xì)胞間的鈣離子，以減少細(xì)胞間的粘著力。經(jīng)無鈣灌流液灌注后再使用含酶灌流液進(jìn)行灌注把組織中的細(xì)胞釋放出來。膠原酶在消化肝的同時(shí)解除了細(xì)胞間接觸抑制或活化了潛在的蛋白激酶、生長因子或受體，使肝細(xì)胞能逐漸適應(yīng)消化分離過程中所發(fā)生的細(xì)胞、外環(huán)境及細(xì)胞的各種改變，這些改變對離體肝細(xì)胞修復(fù)、生長及功能有重要的促進(jìn)作用，有利于肝細(xì)胞的培養(yǎng)。